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花青素溶剂萃取法

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山葡萄籽中原花青素的提取及其含量测定
时间:2020-07-23 08:28 点击次数:

  山葡萄籽中原花青素的提取及其含量测定_数学_自然科学_专业资料。山葡萄籽中原花青素的提取及其含量测定 桑雅丽,李晓春,王欣宇,王俊丽,刘 鑫,尚大勇 【摘 要】摘要:以山葡萄籽为原料,使用超声波辅助提取法和溶剂萃取法两种方法提取原花青素 ,并实验探讨了不同的溶剂对

  山葡萄籽中原花青素的提取及其含量测定 桑雅丽,李晓春,王欣宇,王俊丽,刘 鑫,尚大勇 【摘 要】摘要:以山葡萄籽为原料,使用超声波辅助提取法和溶剂萃取法两种方法提取原花青素 ,并实验探讨了不同的溶剂对原花青素提取率的影响,通过盐酸-香草醛法对得到的原花青素进行了 含量测定.对比两种方法得出结论:在25℃下,以乙醇为溶剂,使用超声波辅助提取法提取的原花青 素的提取率较高,而且纯度也较高. 【期刊名称】赤峰学院学报(自然科学版) 【年(卷),期】2018(034)009 【总页数】3 【关键词】山葡萄籽;原花青素;超声波法;溶剂萃取法;提取率 基金项目:内蒙古自治区教育厅项目资助(NJZY239) 1 前言 原花青素,是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮.其结构是由不同数量的儿茶素、表儿茶素或没食 子酸经C4-C6或C4-C8键缩合而成[1].原花青素是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然 抗氧化剂.葡萄中富含原花青素,尤其是在葡萄籽中达到ω(原花青素)≥5﹪的含量[2].作为世界上种 植面积最大的水果,葡萄主要用于酿造葡萄酒,随之产生的下脚料葡萄籽并未得到充分利用,因此 葡萄籽中提取原花青素具有一定的经济价值和积极意义. 目前对葡萄籽中提取原花青素的研究方法有很多,主要有超声波辅助提取法、溶剂萃取法、微波辅 助提取法、超临界CO2提取法、离子液体辅助提取法、酶提取法等[3-9].比较常用的方法是超声波辅 助提取法和溶剂萃取法[10].超声波辅助提取法具有提取效率高、提取时间短、提取温度低、能保护 有效成分及操作简单易行等优点.而采用溶剂萃取法得到的原花青素纯度较高,实验成本较低,方法 易于操作. 由于葡萄籽中原花青素的提取及其含量测定是一个综合性的实验,其中涉及了称量、干燥、研磨、 过滤、抽滤等系列基本操作,同时在实验中受诸多因素影响,导致提取纯度和测定含量会有所不同 .本实验采用超声波辅助提取法和溶剂萃取法来提取葡萄籽中的原花青素,并对其含量进行了测定.通 过对比找到适宜的实验条件,并提供一定的借鉴作用. 2 实验部分 2.1 仪器及试剂 仪器:恒温水浴锅(HH-Z,上海市宇隆仪器有限公司)、722N可见分光光度计(上海菁华科技仪 器有限公司)、电子天平(TP-214,北京赛多利斯仪器系统有限公司)、旋转蒸发仪(上海申生科 技有限公司)、超声波清洗机(SB-5200 DTN,宁波新芝生物科技股份有限公司)、100目筛(上 虞市沪江仪器厂). 试剂:石油醚(60-90)(GB-AR 沸程60-90℃,西陇化工股份有限公司,批号20120115). 丙酮(GB-AR 含量不少于99.5%,天津市富裕精细化工有限公司,批号20100905). 无水乙醇(GB-AR 含量不少于99.7%,西陇化工股份有限公司,批号20120201). 香草醛(HG-AR 含量不少于99.0%,天津市大茂化学试剂厂,批号20100504). 甲醇(GB-AR 含量不少于99.5%,西陇化工股份有限公司,批号 20120101). 原花青素标准品(GB-AR 含量不少于95%,上海市源叶生物科技有限公司,批号20100121). 葡萄籽(取自内蒙古赤峰的山葡萄,用于酿酒后得到的废弃葡萄籽). 2.2 实验原理 2.2.1 提取原理 超声波辅助提取法(以下简称超声波法)是利用超声波的空化作用、机械效应和热效应等加速有效 物质的释放、扩散和溶解,显著提高提取效率的提取方法.超声波在提取葡萄籽中原花青素方面的应 用主要是和溶剂配合,使提取效率提高.溶剂萃取法一般是指从天然产物中提取有效部位的方法,根 据天然产物中各种成分在溶剂中的溶解性,选用对活性成分溶解度大、对不需要溶出成分溶解度小 的溶剂,而将有效成分从天然产物组织内溶解出来的方法. 由于葡萄籽中原花青素与蛋白质、多糖形成稳定的复合物,因此在提取时对溶剂有一定的要求.不仅 要求溶剂对原花青素有良好的溶解性,还要对氢键有破坏作用.通常选用有机溶剂或含水的有机溶剂 .而使用乙醇、丙酮等有机溶剂提取葡萄籽中的原花青素的同时,也能萃取脂肪油类,这就需要在提 取之前必须先除去葡萄籽中的油脂.由于原花青素不溶于石油醚,因此沉淀过程常选用石油醚使原花 青素沉淀下来. 2.2.2 含量测定原理 盐酸-香草醛法测定原花青素的含量,其原理是基于原花青素A苯环(如图1)化学活性较高,其上 的间苯二酚或间苯三酚可与香草醛发生酚醛缩合反应,在浓酸的作用下,C-4位具有极强的亲电性 ,其醇羟基与C-5、C-7上的酚羟基组成一个苄醇系统,使得4位碳易于生成红色的正碳离子,此红 色的正碳离子由于含有p键的不饱和基团,所以可以吸收可见光,据此正碳离子的吸光度可测定原 花青素的含量[11]. 采用分光光度法在400-760nm范围内对原花青素标准品进行紫外扫描测定其吸光度,并且以原花青 素标准品配成标准系列溶液,测定吸光度并绘制标准曲线,根据标准曲线即可得到样品中原花青素 含量[12].使用盐酸为催化剂,可以避免出现原花青素氧化分解的情况. 2.3 实验步骤 2.3.1 超声波法提取原花青素 将山葡萄籽倒入研钵中研磨,过100目筛,准确称取5.0239g脱脂的山葡萄籽粉末于100mL小烧杯 中,加入50mL石油醚,常温浸泡48h,并用玻璃棒间歇搅拌.用布氏漏斗减压抽滤,脱去溶剂和油 脂.滤饼置于250mL三颈烧瓶中,加入100mL丙酮、无水乙醇或者纯水,在25℃室温下提取操作 2h,全过程施加超声波震荡处理.用布氏漏斗减压抽滤,并用少量溶剂洗涤滤饼3次,合并滤液和洗 涤液置于250mL三颈烧瓶中,用旋转蒸发仪浓缩成浆状物后转移至蒸发皿中,在60℃下烘干产品 ,粉碎后即为山葡萄籽提取物原花青素.称量,计算提取率. 2.3.2 溶剂萃取法提取原花青素 将山葡萄籽倒入研钵中研磨,过100目筛,以石油醚(60-90)为溶剂,用索氏提取器抽提8h,待 石油醚挥发后晾干备用.准确称取5.0239g脱脂的山葡萄籽粉末,用

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